A Thrombopoetin receptor (MPL) gén W515 mutációinak kimutatása

A Laboratóriumi Medicina Intézet Onkológiai Diagnosztikai részlege 2012. november 26-tól új vizsgálatként bevezeti a Thrombopoetin receptor (MPL) gén W515 mutációinak kimutatását.

Az thrombopoetin receptor (MPL) a hemopoietin receptor családba tartozó sejtfelszíni molekula, melyet a megakaryocyták, thrombocyták és csontvelői progenítor sejtek expresszálnak. Ligandja a thrombopoetin, melynek kötődése után a receptor dimerizálódik és a JAK/STAT útvonalon keresztül szignalizál. A molekula 10. exonjában – a transzmembrán/juxtamembrán régióban – írtak le egy kitüntetett kodont érintő mutációkat, amelyek a fehérjében az 515. aminosav (triptofán) cseréjét okozhatják. Leggyakrabban a triptofán-leucin vagy triptofán-lizin csere fordul elő, ritkábban azonban a mutáció lehet csendes vagy STOP kodont is eredményezhet. Amennyiben a mutáció eredménye aminosav csere ez konstans receptor aktivitást és ezzel összefüggésben fokozott sejtproliferációt eredményez. A genetikai elváltozás klinikai jelentőségét az adja, hogy a krónikus myeloproliferatív betegségek közül essentialis thrombocytemiaban (ET) 3-5%, míg idiopathias myelofibrosisban (IMF) 5-7% gyakorisággal fordul elő. Így ezek gyanúja esetében, és ha a JAK2 V617F mutáció nem mutatható ki indokolt a vizsgálat elvégzése. A vizsgálat pozitivitása megerősíti a krónikus myeloproliferatív betegség diagnózisát.

A meghatározás elve:
Hidbridizációs próbákat alkalmazó valósidejű kvantitatív PCR-t követően olvadáspont analízissel határozzuk meg a mutáció jelenlétét. Ez a módszer kb. 3-5%-nyi kóros allél jelenlétét tudja kimutatni. A módszer érzékenységének fokozására perifériás vérminták esetében granulocitákat izolálunk és az ezekből kivont DNS-ből végezzük el a meghatározást.
Miután az 515. kodonban létrejövő nukleotid változások nem minden esetben okoznak aminosav cserét, ezért az olvadáspont analízis pozitivitása esetében bidirekcionális DNS szekvenálással határozzuk meg a pontos genetikai eltérést és az ennek következtében kialakuló fehérje szintű változást. Ez a módszer kb. 10% kóros allél jelenlétét tudja kimutatni.

Az eredmény értékelése:
A vizsgálat eredményeként a következő paramétereket adjuk meg: MPL W515 mutáció: pozitív/negatív Pozitivitás esetén és amennyiben a bidirekcionális szekvenálás eredményes volt megadjuk a pontos nukleotid változást és aminosav cserét is.

A vizsgálat indikációja:
A krónikus myeloproliferatív betegségek molekuláris genetikai kivizsgálásának javasolt algoritmusa:

Vizsgálatkérés, mintatípus, eredmények közlése:
A MEDSOL „KIZMOLPT” és „KIZFLOCY” kérőlapján az “MPL W515 mutáció kimutatása” elnevezés kijelölésével rendelhető meg a vizsgálat. A meghatározáshoz egy cső citráttal vagy EDTA-val alvadásgátolt perifériás vér vagy csontvelői minta szükséges. A vizsgálattal kapcsolatban felmerülő kérdések esetén kérjük forduljanak Dr. Antal-Szalmás Péterhez, az Onkológiai Diagnosztikai részleg vezetőjéhez (50052 vagy 56353-as mellék).

           

Eredményeket kéthetente egyszer adunk ki. Az MPL W515 mutációk kimutatásának pontértéke 4430 pont (DNS izolálással együtt 8355 pont). Amennyiben DNS szekvenálás is történik a vizsgálat pontértéke 28877 pont (DNS izolálással együtt 32802 pont).

 

 

Debrecen, 2012. november 23.

Tisztelettel:
Dr. Kappelmayer János s.k.
egyetemi tanár
a Laboratóriumi Medicina Intézet
igazgatója